微生物常用培养基

三、酵母菌常用培养基

酵母菌为真核微生物，营养需求与细菌类似，但偏好酸性环境（pH 4.5-6.0），常用培养基以葡萄糖、蔗糖等为碳源，酵母膏、蛋白胨为氮源，部分培养基添加抗生素抑制细菌生长。

1. 麦芽汁培养基（Malt Extract Medium）

配方（1000mL）：麦芽汁（比重1.03-1.04）1000mL，可添加15-20g琼脂制成固体培养基，pH 5.4-5.8（115℃、68.9kPa灭菌30min）。

用途：酵母菌的基础培养基，适用于大多数酵母菌（如酿酒酵母、假丝酵母）的生长、增殖及菌落形态观察，也可用于酵母菌的发酵实验。

特点：营养丰富，含多种氨基酸、维生素及糖类，贴合酵母菌的天然营养需求，菌落生长旺盛，形态典型。

2. 马铃薯葡萄糖培养基（Potato Dextrose Agar, PDA）

配方（1000mL）：马铃薯200g（去皮、切块、煮沸30min，过滤取汁）、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水补足至1000mL，pH 5.4-5.8（灭菌条件同麦芽汁培养基）。

用途：适用于酵母菌、霉菌的分离、培养，是真菌实验室最常用的基础培养基之一，可用于酵母菌的纯化、计数及形态观察。

特点：成分天然，营养温和，对酵母菌和霉菌的生长均有良好的促进作用，通用性强。

3.  YEPD培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）

配方（1000mL）：酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g，可添加15-20g琼脂制成固体培养基，pH 5.5-6.0（121℃灭菌20min）。

用途：酵母菌的富集培养基，营养丰富，可促进酵母菌快速增殖，适用于酵母菌的大规模培养、菌种保藏及分子生物学实验（如酵母转化）。

特点：营养浓度高，酵母菌生长速度快，可用于获得大量酵母菌菌体。

4. 孟加拉红培养基（Rose Bengal Agar, RBA）

配方（1000mL）：蛋白胨5g、葡萄糖10g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0.5g、孟加拉红0.03g、链霉素0.1g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL，pH 5.4-5.8（链霉素过滤除菌后加入，灭菌条件同YEPD培养基）。

用途：选择性分离酵母菌和霉菌，链霉素抑制细菌生长，孟加拉红抑制霉菌过度生长，同时使菌落呈现红色，便于观察和计数。

特点：兼具选择性和显色性，常用于食品、环境样品中酵母菌和霉菌的分离与计数。

四、霉菌常用培养基

霉菌为真核微生物，营养需求与酵母菌相似，偏好酸性环境，常用培养基多以淀粉、葡萄糖为碳源，添加有机氮源，部分培养基添加抑制剂抑制细菌和酵母菌生长，便于霉菌的分离与形态观察。

1. 马铃薯葡萄糖培养基（PDA）

配方：同酵母菌常用PDA培养基（见第三部分）。

用途：霉菌的基础培养基，适用于大多数霉菌（如青霉菌、曲霉菌、根霉菌）的分离、纯化、培养及形态观察，是霉菌实验室最常用的培养基。

特点：成分天然，营养均衡，能促进霉菌菌丝生长和孢子产生，菌落形态清晰，便于观察菌丝和孢子结构。

2. 察氏培养基（Czapek Medium）

配方：同放线菌常用察氏培养基（见第二部分）。

用途：适用于霉菌的分离培养，尤其适合青霉菌、曲霉菌的生长，也可用于霉菌的营养缺陷型筛选及代谢研究。

特点：营养成分简单，选择性较弱，可作为霉菌的基础培养和筛选培养基。

3. 马丁培养基（Martin Medium）

配方（1000mL）：蛋白胨5g、酵母膏2g、葡萄糖10g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0.5g、孟加拉红0.03g、链霉素0.1g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL，pH 5.4-5.8（链霉素过滤除菌后加入）。

用途：选择性分离霉菌，链霉素抑制细菌生长，孟加拉红抑制酵母菌生长，适用于土壤、食品、空气样品中霉菌的分离与纯化。

特点：选择性强，能有效排除细菌和酵母菌的干扰，提高霉菌的分离纯度。

4. 玉米粉培养基（Corn Meal Agar, CMA）

配方（1000mL）：玉米粉100g（加水煮沸30min，过滤取汁）、琼脂15-20g、蒸馏水补足至1000mL，pH 5.5-6.0（121℃灭菌20min）。

用途：适用于霉菌的菌丝生长和孢子萌发观察，尤其适合观察霉菌的无性孢子形态，常用于霉菌的分类鉴定。

特点：营养温和，能促进霉菌菌丝的正常生长，便于观察菌丝和孢子的细微结构。

五、支原体常用培养基

支原体无细胞壁，营养需求苛刻，需添加胆固醇、血清（如牛血清）等特殊成分，且对环境敏感，常用培养基为复合培养基，需添加抗生素抑制杂菌生长。

1. 支原体基础培养基（Mycoplasma Base Medium）

配方（1000mL）：蛋白胨10g、酵母浸膏5g、NaCl 5g、K2HPO4 2g、葡萄糖10g、胆固醇0.5g、牛血清200mL、青霉素10000U，pH 7.8-8.0（青霉素过滤除菌，血清56℃灭活30min后加入，基础培养基121℃灭菌20min）。

用途：适用于大多数支原体（如肺炎支原体、解脲脲原体）的培养，可用于支原体的分离、增殖及鉴定。

特点：营养苛刻，添加血清和胆固醇满足支原体的特殊营养需求，青霉素抑制细菌生长，避免杂菌污染。

2. 改良Hayflick培养基

配方（1000mL）：蛋白胨20g、酵母浸膏10g、NaCl 5g、KH2PO4 1g、Na2HPO4 2g、葡萄糖10g、胆固醇0.6g、马血清200mL、青霉素20000U、醋酸铊0.1g，pH 7.6-7.8（醋酸铊、青霉素过滤除菌，血清灭活后加入）。

用途：用于肺炎支原体的分离与培养，醋酸铊可进一步抑制杂菌生长，提高支原体的分离效率，适用于临床样品中肺炎支原体的检测。

特点：选择性强，营养更丰富，能促进肺炎支原体的快速生长，菌落形态典型（呈“荷包蛋”样）。

六、衣原体常用培养基

衣原体为专性细胞内寄生微生物，无法在无细胞培养基中生长，需使用含活细胞的培养基，常用宿主细胞为 McCoy 细胞、HeLa 细胞等，培养基需适配细胞生长，同时提供衣原体生长所需的营养。

1. McCoy 细胞培养基

配方（1000mL）：MEM 培养基（ minimum essential medium ）900mL、胎牛血清100mL、青霉素10000U、链霉素10000μg、两性霉素B 25μg，pH 7.2-7.4（过滤除菌，4℃保存）。

用途：培养 McCoy 细胞，作为衣原体（如沙眼衣原体）的宿主细胞，用于衣原体的分离、培养及鉴定。

特点：适配 McCoy 细胞生长，添加抗生素抑制杂菌和真菌生长，为衣原体寄生提供适宜的细胞环境。

2. HeLa 细胞培养基

配方（1000mL）：RPMI 1640 培养基 850mL、胎牛血清150mL、青霉素10000U、链霉素10000μg，pH 7.2-7.4（过滤除菌，4℃保存）。

用途：培养 HeLa 细胞，作为衣原体的宿主细胞，适用于沙眼衣原体、肺炎衣原体的培养及研究。

特点：营养丰富，能促进 HeLa 细胞快速增殖，为衣原体的寄生和生长提供良好条件。

七、病毒常用培养基

病毒为专性寄生微生物，需依赖宿主细胞才能生长，常用培养基为含活细胞的细胞培养液，根据病毒的宿主特异性选择适配的细胞及培养基，分为原代细胞培养基、传代细胞培养基两类。

（一）原代细胞培养基

1. 鸡胚培养基

配方：鸡胚（9-11日龄），无菌操作取鸡胚尿囊腔或羊膜腔，加入适量生理盐水或 MEM 培养基，37℃、5% CO2 培养。

用途：适用于流感病毒、新城疫病毒等呼吸道病毒的分离、培养及增殖，是病毒培养的经典方法之一。

特点：宿主细胞天然，能模拟病毒的自然感染环境，病毒增殖效率高，适用于病毒的初步分离。

2. 兔肾原代细胞培养基

配方（1000mL）：MEM 培养基 900mL、胎牛血清100mL、青霉素10000U、链霉素10000μg、胰蛋白酶0.25%，pH 7.2-7.4（过滤除菌）。

用途：培养兔肾原代细胞，适用于脊髓灰质炎病毒、腺病毒等的分离与培养。

特点：原代细胞活性高，对病毒的敏感性强，适用于病毒的分离和鉴定。

（二）传代细胞培养基

1. Vero 细胞培养基

配方（1000mL）：DMEM 培养基 850mL、胎牛血清150mL、青霉素10000U、链霉素10000μg，pH 7.2-7.4（过滤除菌，4℃保存）。

用途：培养 Vero 细胞（非洲绿猴肾细胞），适用于多种病毒（如狂犬病毒、乙肝病毒、脊髓灰质炎病毒）的培养、增殖及疫苗制备。

特点：传代稳定，细胞活性强，对多种病毒敏感，是病毒实验室最常用的传代细胞培养基之一。

2. Hep-2 细胞培养基

配方（1000mL）：RPMI 1640 培养基 850mL、胎牛血清150mL、青霉素10000U、链霉素10000μg、谷氨酰胺2mmol/L，pH 7.2-7.4（过滤除菌）。

用途：培养 Hep-2 细胞（人喉上皮癌细胞），适用于呼吸道合胞病毒、腺病毒等的分离与培养。

特点：细胞增殖速度快，对呼吸道病毒敏感性高，常用于临床病毒样品的检测。